Reagen untuk kondensasi peptida

Saat ini, dalam sintesis peptida, metode aktivasi karboksil terutama digunakan untuk menyelesaikan reaksi peptida. Metode paling awal yang digunakan adalah mengaktifkan asam amino menjadi asam klorida, azida, anhidrida simetris, dan anhidrida asam campuran. Namun karena adanya rasemisasi asam amino dalam kondisi ini, bahaya reagen reaksi dan kerumitan pembuatannya, maka secara bertahap digantikan oleh reagen kondensasi selanjutnya, yang dapat dibagi menjadi dua jenis menurut strukturnya.: Reagen kondensasi utama adalah: Tipe karbodiimida, tipe garam onium (Uronium).

Terutama meliputi: DCC, DIC, EDC.HCl tunggu. gunakan DCC untuk melakukan reaksi, karena DCU, ada DMF Kelarutannya sangat kecil dan menghasilkan endapan putih, sehingga umumnya tidak digunakan dalam sintesis fase{2}}padat. Namun, karena murah, ia dapat dihilangkan dengan filtrasi dalam sintesis fasa cair, dan masih digunakan secara luas. EDC.HCl Karena kelarutannya dalam air, ia sering digunakan dalam sambungan polipeptida dan protein, dan juga cukup berhasil. Namun, salah satu kelemahan terbesar dari reagen kondensasi jenis ini adalah jika digunakan sendiri, akan timbul lebih banyak reaksi samping. Namun penelitian menunjukkan bahwa jika ditambahkan selama proses aktivasi HOBt, HOAt Reagen tersebut dapat mengendalikan reaksi samping pada kisaran yang sangat rendah. Mekanisme reaksinya adalah sebagai berikut:

Gambar 2 Mekanisme reaksi Aktivasi DIC

Reagen kondensasi jenis garam onium memiliki reaktivitas tinggi dan kecepatan cepat, dan sekarang banyak digunakan, terutama meliputi: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP tunggu. Selama penggunaan reagen ini perlu ditambahkan basa organik seperti diisopropylethylamine (DIEA), N- Methylmorpholine (NMM), Asam amino hanya dapat diaktifkan setelah reagen ini ditambahkan. Mekanisme reaksinya adalah sebagai berikut:

Resin yang digunakan dalam sintesis peptida fase-padat umumnya adalah bahan polistiren-divinilbenzena, dengan ukuran berkisar antara 75 hingga 150 μm, Derajat ikatan silang-antara 1-2%, dan sebagian besar yang digunakan sekarang adalah 1%, karena pada derajat ikatan silang ini, resin DMF, DCM Memiliki sifat pengembangan yang baik dan memiliki struktur jaringan tiga-dimensi, dan molekul reaktan dapat bergerak bebas di dalam resin. Bagian terpenting dari resin adalah lengan penghubung, yang terhubung ke resin di satu ujung dan berfungsi sebagai tempat reaksi di ujung lainnya. Resin yang saat ini banyak digunakan adalah: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA wait. di PAM, MBHA digunakan dalam strategi BOC, karena sangat stabil terhadap asam, maka perlu HF, TFMSA Hanya dapat dipotong dalam kondisi asam kuat.

Setelah sintesis peptida fase-padat selesai, reagen pembelahan yang sesuai harus dipilih untuk membelah peptida dari resin, lalu diendapkan dengan eter glasial, kumpulkan endapan dengan sentrifugasi, dan HPLC Pisahkan, murnikan, dan bekukan-keringkan untuk mendapatkan produk peptida akhir.

Karena perbedaan resin dan rangkaian asam amino yang dipilih, metode pembelahan yang dipilih selama pembelahan tidak persis sama. Umumnya, kondisi pembelahan dipilih pada kondisi asam. Untuk PAM, Resin MBHA, umumnya menggunakan Pemotongan HF, p-kresol, p-merkaptofenol, anisole dan reagen lainnya perlu ditambahkan selama proses pemotongan. Dan untuk Wang, Rink-Amide, Trt Resin, umumnya menggunakan Pemotongan TFA, tambahkan etilen glikol, anisole sulfida, air, triisopropylsilane, fenol, dll selama proses pemotongan.

Reagen aditif ini terutama digunakan sebagai reagen penangkap karbokation. Tujuannya adalah untuk menangkap karbokation yang dihasilkan selama reaksi pembelahan dan mengurangi reaksi samping yang disebabkan oleh serangan ion karbokation tersebut pada beberapa rantai samping asam amino. Asam amino yang lebih mungkin menghasilkan reaksi samping meliputi: Trp, Tyr. Dosis reagen pemotongan umumnya 10-15 ml/g resin.

Rasio pemotongan yang umum digunakan: HF/p-kresol/p-tiokresol(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2.5/2.5), Reaksi biasanya dilakukan pada suhu kamar 2 jam-4 jam.

Dalam sintesis peptida fase{0}}padat, kita sering menemui masalah kegagalan sintesis peptida atau efisiensi sintesis yang rendah. Alasan utamanya adalah karena rangkaian peptida, karena beberapa rangkaian peptida terbentuk pada resin. -Pelipatan mengubah sifat pembengkakan resin, dan juga dapat mengubur situs aktif reaksi di dalam resin, sehingga menyulitkan reaksi untuk dilanjutkan. Laporan terkini menunjukkan hal itu

Gunakan pelarut campuran, larutan DMSO/DMF, 6N Guanidine /DMF

Tingkatkan suhu reaksi atau gunakan metode microwave

Gunakan garam chaotropic, LiCl, NaClO4 tunggu.

Gunakan resin PEG-PS dengan sifat pembengkakan yang lebih baik, sekaligus mengurangi kandungan resin (0,05-0,2 mmol/g)

​